AG娱乐九游会j9:人维生素B12（VB12）酶联免疫分ELISA试剂盒试验原理流程共享
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本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中维生素B12（VB12）含量。
本试剂盒运用双抗体夹心法测定标本中人维生素B12（VB12）水平。用纯化的人维生素B12（VB12）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中顺次参加维生素B12（VB12），再与HRP符号的维生素B12（VB12）抗体结合，构成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过完全洗刷后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的效果下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的维生素B12（VB12）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），经过规范曲线）浓度。
1. 血清：室温血液天然凝结10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清，保存过程中如呈现沉积，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求挑选EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清，保存过程中如有沉积构成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管搜集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清，保存过程中如有沉积构成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测排泄性的成份时，用无菌管搜集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度到达100万/ml左右。经过重复冻融，以使细胞损坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清。保存过程中如有沉积构成，应再次离心。
5. 安排标本：切开标本后，称取分量。参加必定量的PBS，PH7.4。用液氮敏捷冷冻保存备用。标本消融后仍就坚持2-8℃的温度。参加必定量的PBS（PH7.4），用手艺或匀浆器将标本匀浆充沛。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清。分装后一份待检测，其他冷冻备用。
6.标本收集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行试验。若不能立刻做试验，可将标本放于-20℃保存，但应防止重复冻融
7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3按捺辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
1、规范品的稀释：本试剂盒供给原倍规范品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
40nmol/L 5号规范品 150μl的原倍规范品参加150μl规范品稀释液
2、加样：别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其他各步操作相同）、规范孔、待测样品孔。在酶标包被板上规范品精确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终究稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，悄悄晃动混匀。
4、配液：将30倍（48T的20倍）浓缩洗刷液用蒸馏水30倍（48T的20倍）稀释后备用
5、洗刷：当心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗刷液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
9、显色：每孔先参加显色剂A50μl，再参加显色剂B50μl，悄悄震动混匀，37℃避光显色10分钟.
11、测定：以空白孔调零，450nm波长依序丈量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加停止液后15分钟以内进行。
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗刷液可能会呈现结晶分出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗刷时不影响成果。
3．各步加样均应运用加样器，并常常校正其精确性，以防止试验误差。一次加样时刻最好控制在5分钟内，如标本数量多，引荐运用排枪加样。
4．请每次测定的一起做规范曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于规范品孔榜首孔的OD值），请先用样品稀释液稀释必定倍数（n倍）后再测定，核算时请终究乘以总稀释倍数（×n×5）。
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